鼠李糖苷酶 食品级 酶制剂 西安达尔闻 可定制酶活力

α- L-鼠李糖苷酶催化机制

GH家族的酶可以通过构型翻转(Inverting)机制水解底物中的糖苷键^[8]，在水解反应中，多数鼠李糖苷酶由酸性氨基酸行使催化作用，例如天冬氨酸和谷氨酸^[9]。以鼠李糖苷酶SaRha78A水解糖苷键的过程为例(图 1)，底物鼠李糖的O1是易被攻击的位置，鼠李糖苷酶SaRha78A的氨基酸Glu⁶³⁶为该酶的催化质子供体，可以使底物鼠李糖中的O1发生质子化，另外，与底物鼠李糖的O1和鼠李糖苷酶SaRha78A的Glu⁸⁹⁵有强氢键作用的水分子被氨基酸Glu⁸⁹⁵去质子化，去质子化的水分子攻击底物中的糖苷键，从而完成水解反应^[9]。序列比对和同源建模结果显示，α-L-鼠李糖苷酶的活性位点相对保守^{[8, 10, 12]}，在BsRhaB蛋白序列中，与SaRha78A的Glu⁶³⁶和Glu⁸⁹⁵相对应的保守氨基酸是Glu⁵⁷²和Glu⁸⁴¹。Cui等将BsRhaB的Glu⁵⁷²和Glu⁸⁴¹突变为谷氨酰胺后酶活，证明了Glu⁵⁷²和Glu⁸⁴¹对该酶催化活性的重要性^[8]。同样的，BT0986中的Glu⁴⁶¹和Glu⁵⁹³也被推测为典型的催化残基^[11]。